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犬细粒棘球绦虫抗原ELISA试剂盒使用说明书
 【产品名称】

通用名称:犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测试剂盒

英文名称:Hydatid( Hyd) coproantigens Test Kit for Canine.

【用途】 本试剂盒采用夹心ELISA方法定性检测犬粪细粒棘球绦虫抗原。

规格】 96T/盒

【储藏与有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。

【试剂盒组成】

名称

数量

名称

数量

抗原包被板

96T

终止液

15mL

酶标结合物

12mL

阳性对照

0.8mL

洗涤液10×

100 mL

阴性对照

0.8mL

底物液

15mL

封板膜

3片

显色液

15mL

说明书

1份

样品稀释液2X

100mL

 

 

 

【溶液配制】

1. 洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液 10×按 1:9 稀释,充分混匀即为工作浓度洗涤液。

2. 样品稀释液配制:用蒸馏水或去离子水将样品稀释液 2×按1:1 稀释(如取100mL 浓缩样品稀释液加 100mL 蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作浓度样品稀释液。

【实验准备】所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右),以免温度过低影响抗原抗体反应。

【样品要求】
1. 本试剂适用于检测犬粪样品;
2. 应采集新鲜的犬粪样品进行测试。若不能及时检测,应将粪样低温冻存,防止腐败或反复冻融。如犬粪难以溶解,应适当捣碎处理。

【操作步骤】

1. 样品处理:犬粪样品需要预先低温( -70℃以下) 冷冻 7 天以上,以灭活虫卵。称取 1克犬粪,加入1mL样品稀释液,充分搅拌混匀,静置10分钟,再3000rpm离心10分钟,取上清液待检。
2. 加样反应:样品孔,每孔仅加入100μL待检样品;阴性对照2孔,每孔仅加入100μL阴性对照品;阳性对照 2 孔,每孔仅加入 100μL 阳性对照品。盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。

3. 洗板:甩去孔内液体,每孔注满工作浓度洗涤液洗板3 次,每次均需静置1分钟;最后一次甩净,拍干。

4. 加酶反应:每孔加酶结合物100μL,盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗板,拍干。

5. 显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物液和显色液充分混匀后每孔加100μL,盖好封板膜,37℃避光反应10分钟。

6. 终止反应:加终止液50μL,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。

【结果判定】

1. Cut-off 值(COV)=阴性对照平均OD值×2.1(阴性对照孔OD 值<0.15 时按0.15计)。
2. 有效性判定:
阴性对照孔 OD 值≤0.30( 若大于 0.30 则实验无效);
阳性对照孔 OD 值≥0.50( 若小于 0.50 则实验无效)。

判定标准

样品 OD 值≥COV, 判为犬细粒棘球绦虫抗原阳性;
样品 OD 值<COV, 判为犬细粒棘球绦虫抗原阴性。

【检验方法的局限性】本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。

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