【产品简介】猪蓝耳病（PRRS）是一种高致病率、高死亡率的病毒病，给国内养猪业造成巨大的损失。在免疫预防工作中，接种了疫苗后，由于多种因素可能导致猪不产生或产生低水平蓝耳病病毒抗体。

本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测猪血清中PRRSV抗体，用于免疫疫苗后抗体动态水平监测，指导免疫预防工作，评估猪场蓝耳病免疫状况，也可用于蓝耳病的流行病学调查。

【产品内容】

试剂盒主要成分	数 量
抗原包被板（PRRSV）	96T×1
阳性对照	1ml×1
阴性对照	1ml×1
酶标结合物	20ml×1
样品稀释液	50ml×1
底物液	20ml×1
终止液	15ml×1
20×浓缩洗涤液	50ml×1
封口胶	2份
使用说明书	1份

【成分性状】 

包被板	96孔塑制微孔板，无色透明，干燥，无杂质吸附
酶标结合物	略带黄色澄明液体
阴、阳性对照	略带黄色澄明液体
样品稀释液	略带黄色澄明液体
浓缩洗涤液	无色或略带黄色的澄明液体
底物液	无色或微蓝色澄明液体
终止液	无色澄明液体，低温条件下可能会出现絮状沉淀

【用法与判定】 按以下步骤进行：

1、需要自备的器材

1.1 微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的枪头；

1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒；

1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪；

1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸馏水或去离子水。

2、样品的制备 

用样品稀释液将待检血清样品进行50倍稀释(建议：4μl血清样品加入196μl样品稀释液中)，样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

3、操作步骤 （﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温）

3.1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；

3.2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；

3.3  取100μl稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；

3.4  37℃孵育30min；

3.5  将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；

﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；

3.6  每孔加100μl酶标结合物；

3.7  37℃孵育30min；重复步骤3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光显色）；

3.10  每孔加50μl的终止液；

3.11  立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、试验有效性判断

4.1阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD₄₅₀值≤0.3；

4.2阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD₄₅₀值≥0.6；

4.3临界值(C.O.)计算：临界值=0.18+阴性对照均值；阴性对照OD₄₅₀值大于0.3时应舍弃，如所有阴性对照OD₄₅₀值均大于0.3时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算。

4.4结果判定： 检测样品OD₄₅₀值≥临界值，判定该检测样品为阳性； 检测样品OD₄₅₀值＜临界值，判定该检测样品为阴性。

【注意事项】

（1）待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。

（2）试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。

（3）底物液和终止液对皮肤有刺激性，注意防护。

（4）底物液不要暴露于强光和任何氧化剂；使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。

（5）所有试剂应在2～8℃存放；使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止试剂盒组分受到污染。

（7）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的组分不要混用。

（8）操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

【规格与包装】96T×2

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为12个月